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SYBR GreenⅠ,电泳级说明书

SYBR GreenⅠ,电泳级说明书

产品编号:BTN3280

规格:50μl

产品及特点:

SYBR Green I, EG 是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA 荧光染料,适用于各种核酸电泳分析。

1. 低毒安全,其致突变性低于EB 数倍甚至数十倍。

2. 髙灵敏,SYBR Green I 与dsDNA 结合,荧光信号会增强800-1000倍,至少可检出 20 pg DNA,灵敏度高于EB 染色法10-25 倍。

3. 适用范围广,可适用于多种电泳分析,包括琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等。与百奥的莱博SuperBuffer-2 兼容。

4. 不影响其它修饰酶(Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等)作用。

5. 操作简单,无须脱色或冲洗。

规格及成分:

成分

规格

SYBR Green I, 10000×

50μl

说明书

1份

保存条件:

常低温运输,-20℃闭光保存, 有效期一年。

自备试剂:

电泳缓冲液(稀释用)。

使用方法

使用方法之一:电泳前染色

本方法是在上样时对DNA 进行染色,只适于琼脂糖凝胶电泳。

1. 用高纯度的无水DMSO 将10000×的SYBR Green I 稀释100 倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。

2. 按常规方法制备胶,胶的厚度好不要超过5mm,胶中不能含任何染料。

3. 将100 X 电泳前染色液与DNA 样品(包括DNA Marker)按1:10的比例混合,室温放置10-15 分钟,加上样液后上样。

4. 上样后电泳。

5. 在300 nm 的UV 下观察。UV 的功率好为90W(15W X 6),手持UV 一般功率不够,难以得到满意的灵敏度。除300 nm 外,SYBR Green I 还可以在500 nm 和380 nm 的激发光下观察(如使用Dark Reader 蓝色可见光透色仪)。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。

6. 用配置了520-550 nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。

注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(能阻挡520-550 nm 的光)。

如果能再加上能滤去UV 的滤光片,效果会更好。

7. 后续Southern 或Northern 转膜或胶回收按常规操作进行。

使用方法之二:电泳中染色

本方法是将SYBR Green I 加入到琼脂糖凝胶中,优点是不需要额外的染色处理,只适于琼脂糖凝胶电泳。

1. 将10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中,使其终浓度在0.5-1X 左右,混合均匀后倒胶,厚度好不要超过5 mm。

2. 按常规方法上样和电泳。

3. 电泳后观察和照相处理同方法一。

注意:由于在琼脂糖凝胶中的SYBR Green I 在加热融化时会大量分解,所以琼脂糖凝胶好需要多少配多少。

使用方法之三:电泳后染色

本方法是在电泳后对DNA 进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE,检测灵敏度可达20 pg DNA,但该方法需要单独的染色处理。

1. 按照常规方法进行电泳。

2. 用pH 7.0-8.3 的缓冲液(如:TAE,TBE 或TE)将10000×SYBR Green I 稀释10000 倍成1×电泳后染色液。

3. 将电泳后染色液倒入合适的聚丙烯容器中,放入琼脂糖凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30 分钟。对聚丙烯酰胺凝胶,可取下一块玻璃板,然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE 胶板上,让染色液均匀地覆盖整个PAGE 胶板,静置染色30 分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。

4. 观察和照相处理同方法一。

注意:电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小(胶越大,非特异吸附产生的损耗就越大),一般可重复使用4次。

注意事项:

1. 融化:本产品溶于DMSO 中, 融化时一定要让其彻底融化,否则SYBRGreen I 在液相和固相中浓度不均,影响实验的可重复性。

2. 容器:SYBR Green I 对聚丙烯材料的亲和力非特意吸附小,故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚丙烯类容器,容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙烯容器。

3. 反复使用:由于凝胶和容器的非特意吸附,使用过的SYBR Green I 再染色时效率会逐渐降低。

4. 稳定性:稀释后的SYBR Green I 工作液体适保存条件是闭光、密封、低温(4℃)、pH 在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中,禁止用微波加热处理SYBR Green I。

5. 稀释液:可以用电泳缓冲液稀释SYBR Green I,包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2 等。好不要使用水和pH 7.8(25℃)的Tris 缓冲液。后者的pH 在4℃时会升高到8.4。

6. 其他影响因素:染色液中好不要有SDS,也不要用去污剂洗涤染色用的聚丙烯容器时,0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I 与DNA 结合。用deaza-G 替代G 的DNA 不能有效染色。

疑难解答:

Q:DNA 条带为何出现弯曲或模糊?

A:DNA 过量,将DNA 用量降低到1-5 ng/条带。电泳时间不要超过2 小时,否则SYBR Green I 会从DNA 上分离出来,会产生弥散状条带。电压不能太高,否则产热会影响SYBR Green I 与DNA 的结合。

Q:醇/盐沉淀法能否把结合在DNA 上的SYBR Green I 去掉?

A:可以。其中乙醇效果好,异丙醇次之。但正丁醇、氯仿和苯酚抽提不能去除与DNA 结合的SYBR Green I。

Q:用SYBR Green I 染过的胶能否用于Southern 或Northern Blot?

A:可以,但好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I 与DNA 分开。

Q:能否用SYBR Green I 染色膜上的DNA。

A:可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA,不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。

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